In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.(AU)

Morphology of Pêga jennies term placenta and its fetal-maternal interface / Morfologia da placenta a termo e da interface materno-fetal da jumenta Pêga

This study describes the placental morphology and fetal-maternal interface regarding macroscopic and microscopic aspects from Pêga Jennies at end of pregnancy. Eleven placentas were evaluated after delivery, and four fragments from each placenta were taken in duplicate corresponding to the pregnant uterine horn and non-pregnant horn. Fragments from fetal-maternal interface were obtained from one Jennie at C- section. All fragments were submitted to light microscopy and scanning electron microscopy. Regarding the macroscopic aspect of the placenta, microcotyledons were observed at the endometrial interface, characterized by the diffuse aspect of the placenta. Light microscopy revealed villous type chorion at the chorioallantoic membrane, which were organized in agglomeration villi, presenting a connective tissue stroma and trophoblastic cells. At the fetal-maternal interface, micro placentation, which were composed by inter digitations of agglomeration of villi, limited by maternal crypts, circled by arcades, composed by a fetal trophoblast and an internal portion. In addition, endometrial glands opening were observed. Scanning electron microscopy revealed that the chorioallantoic membranes were covered by villi agglomerations. At the top of those fetal villi we observed cell protrusions from trophoblast cells, which carried debris from maternal tissues. A transversal section from the fetal- maternal interface represented an intricate villi interdigitation with thin maternal caruncle structures, which consist in micro placentation. Macro and microscopic aspects of Jennies placenta, as well as the fetalmaternal interface presented similarities with the observed in mares.

O presente trabalho descreveu a morfologia placentária e a interface materno-fetal de jumentas da raça Pêga, quanto aos aspectos macroscópicos e microscópicos ao final da gestação. Foram avaliadas onze placentas, colhendo-se quatro fragmentos por placenta em duplicata, correspondentes ao corno uterino prenhe e ao corno uterino não prenhe. Fragmentos da interface materno-fetal, oriundos de uma jumenta com gestação a termo, foram obtidos durante o procedimento de cesariana. Os fragmentos foram examinados por microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura. Na macroscopia, foi observado microcotilédone na interface com o endométrio caracterizando placentação difusa. À microscopia de luz na membrana corioalantoide foi observado o córion do tipo viloso, com vilos organizados em tufos vilosos, estroma de tecido conjuntivo e células trofoblásticas. Na interface materno-fetal, microplacentônios, formados pela interdigitação dos tufos vilosos, limitados pelas criptas maternas, circundados pelas arcadas, compostos por uma parte fetal trofoblástica e uma parte interna, observando-se a abertura de glândulas endometriais. À microscopia eletrônica de varredura, foi constatado que a membrana corioalantoide se encontrava coberta por tufos vilosos. Nos ápices dos vilos fetais, foram observadas protrusões de células do trofoblasto, carreando debris de tecidos maternos. Em corte transversal da interface materno-fetal, foi verificada a intrincada interdigitação dos vilos com as finas estruturas das carúnculas maternas, formando os microplacentônios. Os aspectos macro e microscópicos da placenta da jumenta, assim como as descrições da interface materno-fetal apresentaram similaridades com os observados na égua.

Lipid structural information from a single equine embryo by MALDI-MS / Informação estrutural de lipídios a partir de um único embrião equino pela técnica de MALDI-MS

It was reported the potential of MALDI-MS for the characterization of lipid species present in a single equine embryo, and studied some lipid structures detected by collision induced dissociation (CID) experiments. In the positive ion mode spectrum, it were observed mostly protonated and sodiated species of sphingomyelins (SM), phosphatidylcholines (PC) and triacylglycerols (TAG). In the negative ion mode, it were observed phosphatidylethanolamines (PE) and phosphatidylinositols (PI). MS/MS spectrum of most intense lipid ions was performed to show MALDI-MS/MS structural information potential. MS/MS spectrum in the positive mode of m/z 760.6 (attributed as PC34:1) depicted characteristic PC fragments of m/z 184.1 (choline polar head), and the neutral loss (NL) of 183 (phosphorylcholine). For the ion of m/z 766.6 (attributed as PE 38:5), we observed the NL of 140, characteristic of PE. For the ion of m/z 808.7 (attributed as PC 38.5), besides the fragment at m/z 184.1 at the NL of 183, it was possible to observe the loss of trimethylamine (ion of m/z 749.6), and the cyclophosphane (ion of m/z 147.0). Finally, for the negative ion mode, we isolated and fragmented the ion at m/z 863.6, which was attributed as PI 36:1 due to the presence of m/z 153 (glycerol phosphate – H2 O-H), 223 (phospho inositol – 2H2 O-H), 241 (phospho inositol – H2 O-H), 281 (oleic acid), and 581.3 (lysophosphoinositol – H2 O-H). It was concluded that MALDI-MS allowed the detection of a broad range of PC, SM, PE, PI and TAG lipid species, as well as a fast and confident characterization of lipid structures from a single equine embryo.

É relatado o potencial da técnica de MALDI-MS para caracterizar espécies de lipídios presentes em um único embrião equino e estudadas algumas estruturas lipídicas detectadas por dissociação induzida por colisão (CID). No espectro de modo íon positivo, foram observadas espécies, principalmente, protonadas e sodiadas de esfingomielinas (SM), fosfatidileolinas (PC) e triacilgliceróis (TAG). No modo negativo, foram observadas fosfatidiletanolaminas (PE) e fosfatidilinositos (PI). Espectros de íons de lípidos com maior intensidade foram utilizados para demonstrar o potencial da informação estrutural por MALDI-MS/MS. O espectro no modo positivo de m/z (massa sobre carga) 760,6 (atribuída como PC34:1) apresentou características de fragmentos PC de m/z 184,1 (denominada cabeça polar de colina), além de perda neutral (NL) de m/z 183 (fosforilcolina). Para o íon de m/z 766,6 (atribuída como PE38:5), observou-se a NL de 140, característica do PE. Para o íon de m/z 808,7 (38,5 atribuído como PC), além do fragmento m/z 184,1 na NL de 183, foi possível observar a perda de trimetilamina (íon de m/z 749,6) e o ciclofosfano (íon de m/z 147,0). Finalmente, para o modo de íon negativo, foram isolados e fragmentados o íon de m/z 863,6 que foi atribuído como PI36:1, devido à presença de m/z 153 (fosfato de glicerol – H2 O-H ), 223 (inositol fosfo - 2H2 O-H) , 241 (fosfoinositol – H2 O-H), 281 (ácido oleico) e 581,3 (lisofosfoinositol – H2 O+H). Foi concluído que a MALDI - MS permite a detecção de uma ampla gama de espécies de PC, SM, PE, PI e TAG lipídicas, bem como a caracterização rápida e confiante de estruturas lipídicas a partir de um único embrião equino.